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橄榄超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究
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天然产物研究与开发 Nat Prod R es Dev 2007, 19: 198�201 文章编号: 1001� 6880( 2007) 02�0198� 04 � � � 收稿日期: 2005�12�19� � � 接受日期: 2006�04�04 * 通讯作者 E� m ai: l xxiao @ stu. edu . cn 橄榄超氧化物歧化酶的分离纯化与性质研究 肖 � 湘 * , 孔祥强, 徐婉芬 汕头大学理学院生物学系, 汕头 515063 摘� 要: 采用超声波破碎、 硫酸铵分级沉淀、 Sephadex G�100和 DE�52柱层析, 从橄榄中分离纯化 Cu , Zn �SOD, 并 对其部分性质进行分析鉴定。结果得到酶的比活力为 906 . 3 U /mg 。该酶对 H 2O2 和 KCN敏感, 而 T氏液对酶 活性没影响。紫外吸收峰在 275 nm 处, PAGE 蛋白和活性染色呈现 3 条相对应的谱带, 相对分子质量约为 31�63 kD, 亚基相对分子质量约为 15 . 73 kD。此酶对热稳定, 在 p H 7~ 9范围内稳定。 关键词: 橄榄; 超氧化物歧化酶; 分离纯化 中图分类号: Q554 文献标识码: A Studies on Purification and Characters of Superoxide D is mutase from Canarium album X I AO X iang * , KONG X iang�qiang , XU W an�fen Depart m ent of B iol ogy, Science Facult y, Shantou Universit y, Shantou 515063, China Abstract : Copper�zi nc superoxide dis mutase was purifi ed from Canari um album by u ltrasonic , preci p itation w it h a mmon i � u m su lfate , Sephadex G� 100 filtrati on and DE�52 chro m at ography . And its characters were analyzed . The results sho w ed that the specific acti vity of the enzym e was 906 . 3 U /mg. The enzy m e acti vity w as i nh i b ited by KCN and H2 O2, but it w as not affected by Tsuch i hashi sol u tion . Its ultravi olet absorpti on peak was at 275 nm. Three protei n bands of the en� zy m e correspond w ith its activity bands by polyacryla m i de gel electrophoresi s . Its relati ve m ol ecular quality w as 31 . 63 kD and subun i t relati vem ol ecular qualityw as 15 . 73 kD. The enzym e had good heat stability and acid �base stability in p H 7 . 0~ 9 . 0 . K ey words : Canari u m albu m; superox i de d is m utase ; purificati on � � 超氧化物歧化酶 ( superoxi de d i snutase , EC. 1 . 15. 1 . 1 , 简称 SOD )是一种广泛存在于生物体内的 金属酶, 按所含金属离子分为 Cu, Zn�SOD 、 M n�SOD、 Fe� SOD [ 1]。它是生物体内特异清除超氧阴离子自 由基的抗氧化酶 [ 2 , 3], 能催化超氧阴离子自由基歧 化成分子氧和过氧化氢, 从而减轻自由基对机体的 危害。 橄榄 ( Canarium a lbum Raeusch) 又称青果, 橄 榄科橄榄属。在我国已有 2000多年的栽培历史, 主 要分布在广东、 福建、 台湾、 云南等地。橄榄果味甘 涩而带有香气, 有开胃健脾、 去脂减肥、 润喉生津、 清 热解毒、 除烦醒酒等功效 [ 4 , 5]。自古以来闽台民间 就把橄榄作为清热解毒、 利咽治喉的良药。文献对 橄榄的报道多为其形态、 栽培和功效方面, 而对其生 化方面的研究很少。本文从橄榄中分离纯化 Cu, Zn�SOD , 并对其性质进行分析鉴定。 1� 材料与方法 1 . 1� 材料 新鲜橄榄购于汕头市衡山市场。 1 . 2� 主要试剂与仪器 Sephadex G� 100 ( Phar macia 公 司 ); DE� 52 (W hat m an公司 ); 考马斯亮蓝 R250( Fluka公司 ); Tri s(M erck公司 ); 标准蛋白 ( 上海东风生化试剂 厂 )。 Universal 32R台式高速冷冻离心机 (德国 H et � tich公司 ); HD�1核酸蛋白检测仪 (上海沪西仪器 厂 ); UV�1240紫外分光光度计 (日本岛津 ); J Y 92� �超声波细胞粉碎机 ( 宁波新芝科器研究所 ); S HG�C生物化学发光测量仪 (上海立新仪器厂 )。 1 . 3� 方法 1�3�1� 橄榄 SOD 的分离纯化 新鲜橄榄果肉 200 g , 加入 400 mL p H 8 . 2 , 50

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